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染色體CBG標(biāo)本制備
點(diǎn)擊次數(shù)：875 發(fā)布時(shí)間：2010-7-5
一、原理
異染色質(zhì)在整個(gè)分裂間期及分裂期都是濃縮的，因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近，或在染色體臂上呈現(xiàn)“團(tuán)塊”，這些染色質(zhì)主要由C顯帶技術(shù)呈現(xiàn)，故稱(chēng)為C帶。CBG即C帶、Ba（OH）2、Giemsa的簡(jiǎn)寫(xiě)。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA，但在C帶區(qū)有很強(qiáng)抗性，仍保留大部分DNA，Giemsa染色后可見(jiàn)效果良好的C帶。抽取DNA的過(guò)程由三個(gè)連續(xù)操作形成。首先，酸處理可使DNA脫嘌呤，但未使DNA骨架斷裂；其次熱堿處理可使DNA變性，促進(jìn)繼發(fā)的DNA溶解；zui后，熱鹽溶液使DNA骨架斷開(kāi)并使碎片溶解進(jìn)入溶液中。因此，zui終以Giemsa染料顯示出DNA的不同分布。在優(yōu)良的C帶標(biāo)本中，常染色質(zhì)只呈現(xiàn)中期染色體的一般外貌，結(jié)構(gòu)異染色質(zhì)區(qū)著色很深。
C帶在檢查1、9、16特別是Y染色體的異質(zhì)區(qū)時(shí)尤為重要。
二、用品和試劑
0.2N HCl，5% Ba（OH）2，2×SSC，Giemsa染色液。恒溫水浴箱，染色缸。其余同外周血染色體制備。
三、操作步驟
（一）方法一
l．酸處理：常規(guī)制作的染色體標(biāo)本（未染色）置0.2N HCl（室溫）處理15—30分鐘。水洗。
2．堿處理：浸入已預(yù)溫至56℃的5% Ba（OH）2水溶液10分鐘。水洗。
3．熱鹽處理：置2×SSC溶液（67℃）處理60—90分鐘。水洗。
4．染色：l∶10 Giemsa染色液染色10—5分鐘。水洗。氣干。
5．鏡檢。
（二）方法二
l．酸處理：常規(guī)制作的染色體標(biāo)本（未染色）置0.2N HCl（室溫）處理60分鐘。水洗。
2．堿處理：浸入1% Ba（OH）2水溶液（50℃）中15—20秒。水洗。
3．熱鹽處理：置2×SSC溶液（60℃）90分鐘。水洗三次。
4．染色：l∶10 Giemsa染色液染色10分鐘。水洗。氣干。
5．鏡檢。